人结核分支杆菌HSP70的原核表达质粒的构建及诱导表达

摘要：

目的构建编码人结核分支杆菌(TB)热休克蛋白70(HSP70)的Dnak基因的重组原核表达质粒,并研究其表达动力学.方法质粒pMT70用限制性内切酶消化、核酸体外扩增(PCR)及末端修饰后可获得Dnak基因全长,与大肠杆菌质粒pRSET连接重组,阳性克隆经酶切分析鉴定后即为质粒pMT703,转入受体菌BL21DE3中,经诱导剂异丙基硫代-β-D-半乳糖(IPTG)诱导,由SDS-PAGE、Western-blot鉴定,并以薄层扫描分析.结果重组表达质粒pMT703构建成功,可在大肠杆菌中高效表达,诱导后1h即开始表达,16h达高峰期.表达量占菌体总蛋白的65%,可溶性产物占总表达量的90%.结论 pMT703质粒不仅构建成功且更有利于对分支杆菌HSP70蛋白的纯化,方便对其抗结核、抗肿瘤的研究.

关键词：结核分支杆菌、原核表达、热休克蛋白70

所属期刊栏目：19

分类号：R378.911(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：新乡医学院校科研和教改项目0147201;河南省教委科研项目20011800002

在线出版日期：2004-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：355-359