9型重组腺相关病毒转染大鼠心脏成纤维细胞的体外研究

摘要：

目的:研究9型重组腺相关病毒(rAAV9)对大鼠心脏成纤维细胞的转染效率及其对细胞生长的影响.方法:分离、获取并培养大鼠心脏成纤维细胞,以携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的rAAV9(rAAV9-EGFP)转染大鼠心脏成纤维细胞,以转染复数 (MOI)将细胞分为未转染病毒A组、B组MOI=1×104 、C组MOI=1×105 、D组MOI=1×106 ,倒置荧光显微镜下观察大鼠心脏成纤维细胞中EGFP的表达情况,观察转染后细胞生长形态,应用流式细胞仪检测rAAV9-EGFP对大鼠心脏成纤维细胞的转染效率,应用AlamarBlue法检测rAAV9-EGFP对大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响.结果:D组的细胞于转染后24h即可观察到EGFP表达,B组与C组细胞则于48h观察到EGFP的表达.倒置荧光显微镜下观察转染后大鼠心脏成纤维细胞生长及形态正常,镜下观察显示各组细胞表达EGFP的强度随MOI值的增高而增强,同时亦随着时间延长而增强,EGFP表达在转染120h达到高峰,此时检测rAAV9-EGFP对心脏成纤维细胞的转染效率,分别为B组:(2.6 ±0.2)%,C组:(7.3 ±1.4)%,D组:(45.1±2.7)%.AlamarBlue法检测表明转染组细胞各时点与未转染组的还原率比值接近于1.结论:rAAV9-EGFP能够有效转染大鼠心脏成纤维细胞,转染后EGFP基因能够有效得以表达,rAAV9对细胞增殖无明显抑制.9型重组腺相关病毒可作为基因治疗心脏疾病研究的理想载体.

关键词：病毒、绿色荧光蛋白类、成纤维细胞、转染

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分类号：Q78509(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目30760263;新疆自治区卫生厅青年科技人才专项基金2007Y23;新疆维吾尔自治区重点实验室XJDX0903

在线出版日期：2010-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：121-125,封2