非糖基化尿激酶原突变体的研究

摘要：

目的:构建一种非糖基化、抗凝血酶激活的尿激酶原突变体,在CHO-dhfr-(二氢叶酸还原酶缺陷型-中国仓鼠卵巢)细胞中表达,收取无血清培养上清,并鉴定其活性.方法:使用PCR扩增的方法,将302位天冬酰胺(Asn302)突变为丙氨酸(Ala302),去掉糖基化位点;将156位精氨酸(Arg156)突变为赖氨酸(Lys156),去掉凝血酶作用位点.将突变体基因转染到CHO-dhfr-细胞中.收取无血清培养上清,并用纤维蛋白板溶解圈法鉴定活性.结果:PCR产物经琼脂糖电泳鉴定分子量略大于1 200道尔顿(dalton),与理论分子量1 296道尔顿符合.转染成功的细胞株用于扩大培养.纤维蛋白板溶解圈法测定上清活性为295.58 IU/ml.结论:非糖基化、抗凝血酶的单链尿激酶型纤溶酶原激活剂突变体构建成功.转染后细胞生长良好,表达水平较高.

关键词：尿纤溶酶原激活物、凝血酶、糖基化

所属期刊栏目：16

分类号：R446.11209(诊断学)

在线出版日期：2007-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：236-240