碳酸酐酶9对低氧诱导未足月胎儿视网膜微血管内皮细胞增殖影响的研究

摘要：

目的:探讨碳酸酐酶9（carbonic anhydrase 9，CA9）对低氧诱导未足月胎儿视网膜微血管内皮细胞（retinal microvascular endothelial cell，RMEC）增殖的影响。方法:获取广东省妇幼保健院自然流产未足月胎儿眼球，分离视网膜并得到RMEC，使用CD34进行内皮细胞鉴定。将得到的胎儿RMEC及购买的成人RMEC置于常氧及低氧培养箱（1%O
2+5%CO
2+94%N
2）培养，使用实时荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测CA9的差异表达。使用小干扰RNA技术敲降CA9基因后，CCK-8法检测细胞增殖情况，加入CA9抑制剂U-104后CCK-8法检测细胞活率。
结果:成功提取原代RMEC，第三代细胞CD34免疫荧光染色阳性细胞计数近100%。未足月胎儿及成人RMEC低氧组CA9 mRNA表达量均高于常氧组（胎儿67.80±10.31比1.00±0.04，
P<0.001；成人1.72±0.22比1.00±0.02，
P=0.014）；蛋白质印迹法检测可见未足月胎儿RMEC低氧组CA9表达量明显升高，与CA9 mRNA表达量相对应。在未足月胎儿RMEC转染siCA9 20 nM时，敲降效率可达95%（
P<0.001）。CCK-8法检测敲降CA9基因48 h后对未足月胎儿RMEC增殖的影响，可见siCA9组OD值低于阴性对照siNC组（0.57±0.05比0.90±0.03，
P<0.001）。加入100 μM CA9抑制剂U-104，低氧+100 μM U-104组未足月胎儿RMEC细胞活率低于低氧组（99.16%±3.82%比119.10%±1.72%，
P=0.002）。
结论:在低氧诱导模型中，CA9在成人及未足月胎儿的RMEC表达不同，抑制CA9可抑制未足月胎儿RMEC增殖。

关键词：早产儿视网膜病、碳酸酐酶9、视网膜微血管内皮细胞、低氧、细胞增殖

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资助基金：广东省自然科学基金项目2019A1515011417;广东省高水平医院建设专项ynkt2021-2216;Natural Science Foundation of Guangdong Province2019A1515011417;Guangdong High-level Hospital Construction Fundynkt2021-2216

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：38-44