巨结肠家系RET基因突变功能研究

摘要：

目的:研究巨结肠家系RET基因新发无义突变c.2599G>T是否具有致病功能。方法:利用定点突变技术构建RET c.2599G>T突变型过表达腺病毒，感染人胚肾细胞HEK-293。实验分为4组：未感染组(Control组)、阴性对照腺病毒对照组(NC组)、RET野生型过表达腺病毒组(WT组)、RET c.2599G>T突变型过表达腺病毒组(c.2599G>T组)。利用RT-PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光定位、Transwell迁移实验、CCK-8增殖实验、流式细胞凋亡检测技术，胶质细胞源性神经营养因子(glial-derived neurotrophic factor，GDNF)处理细胞后检测p-RET和p-ERK1/2，探究突变RET基因的功能。多组均数间比较采用Tukey's
T检验，多个研究组均数与对照组均数比较采用Dunnett-
T检验。
结果:c.2599G>T组不能检测到RET全长蛋白。Transwell检测细胞迁移个数c.2599G>T组(100.80±14.72)较WT组(155.20±7.89)迁移能力下降(
P<0.001)。CCK-8检测细胞增殖能力c.2599G>T组比WT组分别在24 h (0.68±0.06比0.83±0.10)、48 h(0.90±0.10比1.17±0.13)、72 h(1.07±0.11比1.401±0.19)和96 h(1.38±0.12比1.68±0.15)明显下降(
P<0.05)。流式细胞技术检测凋亡，c.2599G>T组3.12%较WT组0.85%增加(
P<0.001)。应用GDNF处理细胞后，蛋白质印迹法检测p-RET和p-ERK1/2蛋白表达，c.2599G>T组(0.79±0.02，5.60±0.02)较WT组(72.04±0.58，10.72±0.02)均明显下降(
P<0.001)。
结论:RET基因无义突变c.2599G>T，是具有功能的新发突变，具有致病性，对先天性巨结肠的遗传咨询具有指导意义。

关键词：先天性巨结肠、功能分析、RET基因、无义突变

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资助基金：辽宁省重点研发计划联合计划2020JH2/10300131;辽宁省兴辽英才计划XLYC1908008;Key Research & Development Project of Liaoning Province2020JH2/10300131;Revitalization of Liaoning Provincial Talent ProgramXLYC1908008

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：676-682