10.3760/cma.j.cn421158-20220427-00305
miR-20a-5p靶向调控NFKBIB对神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y增殖、侵袭和迁移的影响
目的:探讨miR-20a-5p对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞系SH-SY5Y增殖、侵袭和迁移的影响及其调控机制。方法:将miR-20a-5p过表达及抑制基因分别转染至SH-SY5Y细胞,根据实验需要分为miR-20a-5p过表达组、NC过表达组、miR-20a-5p抑制组、NC抑制组,通过体外实验研究miR-20a-5p对NB细胞系SH-SY5Y的增殖、侵袭和迁移的影响。根据生物信息学预测软件初步预测NFKBIB(IκB β)可能为miR-20a-5p的下游靶基因,运用双荧光素酶报告实验、定量反转录PCR (qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)验证miR-20a-5p靶向调控NFKBIB基因。通过细胞集落形成实验、CCK-8实验、细胞侵袭实验、细胞划痕实验、流式细胞术研究miR-20a-5p在SH-SY5Y细胞中增殖、侵袭和迁移的生物学功能。在mRNA水平上,运用qRT-PCR检测每组细胞中NFKBIB mRNA的表达量;用Western blot检测在每组细胞中NFKBIB、NF-κB蛋白的表达量。结果:细胞集落形成实验显示miR-20a-5p过表达组细胞集落形成数为(146±16)个,较NC过表达组(39±1)个显著增高,差异有统计学意义(
P<0. 01)。CCK-8实验结果显示miR-20a-5p过表达组较NC过表达组显著促进SH-SY5Y细胞增殖。细胞侵袭实验结果显示miR-20a-5p过表达组细胞侵袭数量为(117±5)个,较NC过表达组(55±2)个显著增多,差异有统计学意义(
P<0. 001)。细胞划痕实验结果显示miR-20a-5p过表达组细胞愈合率为(0. 56±0. 05)%,NC过表组细胞愈合率为(0. 40±0. 08)%,差异有统计学意义(
P<0. 05)。流式细胞术实验结果显示抑制miR-20a-5p后,SH-SY5Y细胞早期凋亡的细胞数较NC抑制组增多。抑制miR-20a-5p的表达后,上述实验结果与过表达miR-20a-5p时相反,差异均有统计学意义(
P<0. 05)。过表达miR-20a-5p后,qRT-PCR结果显示miR-20a-5p过表达组NFKBIB mRNA表达含量为(0. 36±0. 24),较NC过表达组(1. 00)显著降低;Western blot结果显示miR-20a-5p过表达组NFKBIB表达量为(1. 15±0. 30),较NC过表达组的表达量(1. 92±0. 31)显著降低;NF-κB表达量为(4. 17±0. 45),较NC过表达组的表达量(1. 64±0. 39)显著增加,差异均有统计学意义(
P< 0. 05)。
结论:miR-20a-5p促进NB细胞系SH-SY5Y的增殖、侵袭和迁移能力,可能是通过抑制NFKBIB的表达来激活NF-κB通路,或可作为促进NB细胞增殖、侵袭和迁移的潜在干预靶点。
神经母细胞瘤、核因子κB、增殖、侵袭、迁移
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新疆维吾尔自治区区域协同创新专项(科技援疆计划)项目2020E0267;Special Project for Regional Collaborative Innovation of Xinjiang Uygur Autonomous Region Science & Technology Assistance Plan2020E0267
2023-05-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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