慢性肾功能不全幼鼠胫骨生长板软骨细胞糖原合成酶激酶3β表达水平变化对生长板发育的影响

摘要：

目的:观察慢性肾功能不全(chroic renal insufficiency，CRI)幼鼠胫骨生长板软骨细胞糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β，GSK3β)表达水平变化对生长板发育的影响。方法:将40只4周龄雄性SD幼鼠，按随机数字表法平均分为CRI组(腺嘌呤150 mg·kg
-1·d
-1灌胃，n＝20)和对照组(同剂量蒸馏水灌胃，n＝20)，连续灌胃6周后处死全部幼鼠，取双侧胫骨制作组织学切片、番红固绿染色后比较两组幼鼠胫骨近端生长板宽度，应用免疫组织化学技术检测GSK3β表达部位及水平；提取两组胫骨生长板软骨细胞进行体外培养至第3代，观测软骨细胞内GSK3β、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)、Wnt/β通路关键蛋白β联蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13，MMP-13)表达水平，裂解细胞后应用蛋白质印迹法技术检测GSK3β、p-GSK3β、β-catenin、MMP-13表达水平。两组间比较采用成组
t检验。
结果:幼鼠胫骨组织学切片显示CRI组生长板相对宽度为(0.52±0.14)，对照组为(1.00±0.07)，组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)。幼鼠胫骨组织学切片免疫组织化学结果显示CRI组软骨细胞GSK3β评分为(1.8±0.4)分，对照组为(7.1±2.2)分，组间差异有统计学意义(
P<0.001)。体外细胞实验免疫组织化学结果显示CRI组软骨细胞内GSK3β评分为(0.94±0.32)分，对照组为(5.63±1.71)分，组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)；CRI组p-GSK3β评分为(4.97±1.10)分，对照组为(1.58±0.51)分，组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)；CRI组β-catenin评分为(5.11±2.03)分，对照组为(1.43±0.31)分，组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)；CRI组MMP-13评分为(6.25±2.33)分，对照组为(2.57±1.13)分，组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)。蛋白质印迹法结果显示，CRI软骨细胞内GSK3β表达水平为(0.13±0.04)，对照组为(0.38±0.11)，组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)；CRI软骨细胞内p-GSK3β表达水平为(0.52±0.18)，对照组为(0.19±0.08)，组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)；CRI组软骨细胞内β-catenin表达水平为(1.03±0.21)，对照组为(0.41±0.17)，组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)；CRI组软骨细胞内MMP-13表达水平为(0.56±0.18)，对照组为(0.20±0.05)，组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)。
结论:肾功能不全幼鼠胫骨生长板软骨细胞内GSK3β表达减少、其失活状态蛋白p-GSK3β表达明显增多，导致Wnt/β通路过度激活，生长板软骨细胞加速分化，生长板出现闭合趋势。

关键词：肾功能不全、生长板、软骨细胞

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资助基金：山西省自然科学基金201701D121161;山西省重点研发计划项目201803D31160;Natural Science Foundation of Shanxi Province of China201701D121161;Key Research & Development Project of Shanxi Province201803D31160

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1124-1130