10.3760/cma.j.cn421158-20200616-00422
慢性肾功能不全幼鼠胫骨生长板软骨细胞糖原合成酶激酶3β表达水平变化对生长板发育的影响
目的:观察慢性肾功能不全(chroic renal insufficiency,CRI)幼鼠胫骨生长板软骨细胞糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)表达水平变化对生长板发育的影响。方法:将40只4周龄雄性SD幼鼠,按随机数字表法平均分为CRI组(腺嘌呤150 mg·kg
-1·d
-1灌胃,n=20)和对照组(同剂量蒸馏水灌胃,n=20),连续灌胃6周后处死全部幼鼠,取双侧胫骨制作组织学切片、番红固绿染色后比较两组幼鼠胫骨近端生长板宽度,应用免疫组织化学技术检测GSK3β表达部位及水平;提取两组胫骨生长板软骨细胞进行体外培养至第3代,观测软骨细胞内GSK3β、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)、Wnt/β通路关键蛋白β联蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)表达水平,裂解细胞后应用蛋白质印迹法技术检测GSK3β、p-GSK3β、β-catenin、MMP-13表达水平。两组间比较采用成组
t检验。
结果:幼鼠胫骨组织学切片显示CRI组生长板相对宽度为(0.52±0.14),对照组为(1.00±0.07),组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)。幼鼠胫骨组织学切片免疫组织化学结果显示CRI组软骨细胞GSK3β评分为(1.8±0.4)分,对照组为(7.1±2.2)分,组间差异有统计学意义(
P<0.001)。体外细胞实验免疫组织化学结果显示CRI组软骨细胞内GSK3β评分为(0.94±0.32)分,对照组为(5.63±1.71)分,组间比较差异有统计学意义(
P<0.001);CRI组p-GSK3β评分为(4.97±1.10)分,对照组为(1.58±0.51)分,组间比较差异有统计学意义(
P<0.001);CRI组β-catenin评分为(5.11±2.03)分,对照组为(1.43±0.31)分,组间比较差异有统计学意义(
P<0.001);CRI组MMP-13评分为(6.25±2.33)分,对照组为(2.57±1.13)分,组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)。蛋白质印迹法结果显示,CRI软骨细胞内GSK3β表达水平为(0.13±0.04),对照组为(0.38±0.11),组间比较差异有统计学意义(
P<0.001);CRI软骨细胞内p-GSK3β表达水平为(0.52±0.18),对照组为(0.19±0.08),组间比较差异有统计学意义(
P<0.001);CRI组软骨细胞内β-catenin表达水平为(1.03±0.21),对照组为(0.41±0.17),组间比较差异有统计学意义(
P<0.001);CRI组软骨细胞内MMP-13表达水平为(0.56±0.18),对照组为(0.20±0.05),组间比较差异有统计学意义(
P<0.001)。
结论:肾功能不全幼鼠胫骨生长板软骨细胞内GSK3β表达减少、其失活状态蛋白p-GSK3β表达明显增多,导致Wnt/β通路过度激活,生长板软骨细胞加速分化,生长板出现闭合趋势。
肾功能不全、生长板、软骨细胞
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山西省自然科学基金201701D121161;山西省重点研发计划项目201803D31160;Natural Science Foundation of Shanxi Province of China201701D121161;Key Research & Development Project of Shanxi Province201803D31160
2023-05-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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