靶向抑制髓系抑制性细胞调控肿瘤微环境对神经母细胞瘤荷瘤小鼠免疫疗效的影响

摘要：

目的:探索靶向抑制髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell, MDSC)调控神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)肿瘤微环境对增强效应细胞体内杀伤效应、提高NB免疫治疗效果的作用和机制。方法:以BALB/c小鼠为实验对象，利用NB细胞注射建立荷瘤小鼠模型。按随机数字表法将小鼠随机分为多柔比星(doxorubicin, DOX)2.5 mg/kg组、DOX 5 mg/kg组、多巴胺(dopamine, DA)50 mg/kg组和对照组进行药物筛选，每组20只。分别于NB细胞接种后第7天和第12天注射DOX、DA，于NB细胞接种后第14、17、23天检测比较各组小鼠瘤体内MDSC数量分布及凋亡率、T细胞周期、Treg水平和TAM分布，MDSC培养上清中Arg-1、iNOS、ROS、IL-10、TGF-β含量，比较各组肿瘤生长曲线。根据抑瘤效果选择抑制MDSC最佳药物及浓度。制备NB抗原特异性CTL。按随机数字表法将荷瘤小鼠随机分为DOX组、CTL组、抗GD2组、DOX＋CTL组、DOX＋抗GD2组和对照组进行免疫治疗对比研究，每组20只。在抑制MDSC基础上实施NB荷瘤小鼠免疫治疗，检测比较各组肿瘤生长曲线，对比各组瘤体中浸润CTL、颗粒酶和穿孔素表达，外周血IL-2和IFN-γ水平。采用SPSS 26.0软件进行统计学处理。结果:随时间变化，各药物筛选组和对照组比较，MDSC增长比例显著降低(
P＝0.001)，瘤体中T细胞增殖和对照组比较先升(
P<0.001)后抑(
P>0.05)；TAM由M1型向M2型极化减弱；Treg水平受抑；MDSC培养上清中Arg-1、iNOS、ROS和IL-10含量和对照组比较均降低，且差异均有统计学意义(
P均<0.05)；不同药物筛选组肿瘤体积比较，差异有统计学意义(
P＝0.018)。以上各指标均以DOX2.5组表现最为显著，肿瘤生长最缓慢，抑制MDSC作用最强。小剂量DOX干扰后荷瘤小鼠实施免疫治疗，和对照组比较，各组瘤体浸润CD4
＋、CD8
＋淋巴细胞比例上升，颗粒酶、穿孔素浓度上升，外周血IL-2、IFN-γ浓度上升，且差异均有统计学意义(
P均＝0)。以上各指标均以DOX2.5＋抗GD2组、DOX2.5＋CTL组和抗GD2组浓度相对较高。各免疫治疗组肿瘤体积两两比较，除抗GD2组和CTL组、DOX＋CTL组和DOX＋GD2组外，其余各组间比较，差异均有统计学意义(
P<0.05)。
结论:小剂量DOX可作为免疫调节剂靶向抑制NB肿瘤微环境中MDSC，消除免疫耐受，提高免疫治疗效果；其作用机制与抑制MDSC可双向调节机体天然免疫和T细胞过继性免疫有关。

关键词：神经母细胞瘤、小鼠、免疫治疗

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资助基金：国家自然科学基金面上项目81472503;National Natural Science Foundation of China81472503

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：846-854