目的:研究
elavl1/HuR对斑马鱼肠神经系统早期发育的影响。
方法:应用免疫组化方法检测elavl1、HuC/HuD在野生型斑马鱼肠道的表达。挑选25个斑马鱼胚胎,应用Western Blot法检测elavl1在受精后24~96 h野生型斑马鱼中的蛋白表达水平。在野生型斑马鱼胚胎处于1细胞期时分别显微注射4 ng、8 ng
elavl1a morpholino和8 ng control morpholino,挑选25个受精后24 h的胚胎采用Western Blot法检测elavl1的蛋白表达,免疫组化检测受精后72 h、96 h的胚胎斑马鱼肠道神经元的分布情况。
结果:elavl1在斑马鱼全身都有表达,而HuC/HuD在第四天斑马鱼肠道部位出现表达;在受精后24~96 h时期,elavl1在斑马鱼中的蛋白表达量随斑马鱼生长而增加,且受精后96 h时elavl1蛋白量明显高于受精后24 h、48 h、72 h,差异有统计学意义(
P<0.05);分别注射4 ng、8 ng
elavl1a Mo和8 ng Con Mo后,发现注射8 ng Con Mo组elavl1蛋白含量高于其他两组,且差异有统计学意义(
P<0.05);敲降elavl1a后免疫组化显示在受精后72 h时三组都不能在肠道末端明显观察到神经元,受精后96 h时可以观察到
elavl1a Mo 8 ng组和
elavl1a Mo 4 ng组较Con Mo 8 ng组斑马鱼肠神经元数量有所减少,每组随机抽取5条斑马鱼统计肠道末端到前面四个体节长度的肠道神经元数量,发现
elavl1a Mo 8 ng组和
elavl1a Mo 4 ng组较Con Mo 8 ng组斑马鱼肠神经元数量差异有统计学意义(
P<0.05)。
结论:elavl1a是斑马鱼肠神经发育过程中重要基因,敲降elavl1a会减少肠神经元细胞数量。
RNA结合蛋白、肠神经系统、斑马鱼
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国家自然科学基金31501146;浙江省科技计划(实验动物)项目2017C37127;浙江省医药卫生科技计划项目2018267092;温州市科技局项目Y20160195;National Natural Science Foundation of China31501146;Zhejiang Province Science & Technology Laboratory Animal Project2017C37127;Medical Health Science & Technology Program of Zhejiang Provincial Health Commission2018267092;Wenzhou Municipal Sci-Tech Bureau ProgramY20160195