LSD1在神经母细胞瘤细胞中促进β-catenin在胞质中堆积

摘要：

目的 本研究旨在证实在神经母细胞瘤细胞(neuroblastoma,NB)中赖氨酸特异性去甲基化转移酶1 (1ysine specific demethylase 1,LSD1)促进β-联蛋白(β-catenin)在胞质中堆积,证实LSD1通过激活Wnt通路,从而引起NB细胞的增殖和转移,并探索其分子机制.方法 将对数生长期的293T细胞,接种在6孔培养板上,感染时细胞密度控制在60％～80％,每孔 2×106个细胞.分别配置溶液A:cDNA 10μl+ cDNA质粒转染培养基90μl;溶液B:空载质粒转染试剂5μl+ cDNA质粒转染培养基95 λl,混合溶液A和溶液B,室温放置30 min形成转染复合物,在含有细胞的无抗生素培养基中加入转染复合物使终体积为2 ml.Quantitative real-time PCR(qPCR)检测LSD1在NB细胞株SH-SY5Y细胞中的表达.LSD1慢病毒过表达载体的构建上调LSD1在NB中的表达.Western blot方法检测在SH-SY5Y细胞株调控LSD1表达后β-catenin的变化.免疫组织化学方法检测在SH-SY5Y细胞株调控LSD1表达后β-catenin的变化.结果 利用Western bolt方法检测人上皮细胞、大鼠神经元细胞、NB细胞中LSD1的表达量,人上皮细胞、大鼠神经元细胞、NB细胞三者的灰度值分别为133.87±10.54、135.00±12.48、192.00± 13.23,三组进行单因素方差分析无明显统计学意义(P＞0.05);建立LSD1稳转细胞株前后,SH-SY5Y细胞表达LSD1量有变化,通过qPCR对SH-SY5Y细胞株中的LSD1基因的相对量进行检测,LSD1表达抑制组的阈值循环数为22.003±0.320,转染空白质粒慢病毒载体的SH-SY5Y细胞组的阈值循环数为17.330±1.166,转染LSD1过表达慢病毒载体组的阈值循环数为13.216±0.137三组进行单因素方差分析,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 在神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞中,β-catenin随着LSD1的表达量的变化而变化,两者在SH-SY5Y细胞中的量呈正相关.

关键词：神经母细胞瘤、β联蛋白、慢病毒

所属期刊栏目：39

资助基金：国家自然科学基金面上项目81272986、8150100530、81602395;青岛大学“临床医学+X”面上项目 The National Natural Science Foundation of China81272986、 8150100530、81602395;Clinical Medicine + X of Qingdao University

在线出版日期：2018-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：296-301,289