小鼠肠神经前体细胞培养、转染和功能研究

摘要：

目的 建立小鼠肠神经前体细胞体外培养和纯化的方法,寻找合适的肠神经前体细胞转染方式进行增殖分化等功能实验,为研究肠神经系统发育及疾病奠定基础.方法 取胎龄16.5d(E16.5)的ICR小鼠胚胎肠道,经胶原酶消化后制成单细胞悬液,接种到神经前体细胞培养基中,多次换液后进行免疫学鉴定.纯度达到95％的神经前体细胞使用lipo2000,RNAimax,慢病毒等三种方式进行mmu-miR-346转染,通过实时荧光定量PCR检测神经前体细胞内mmu-miR-346的表达来比较这三种方式的转染效率.使用EdU法检测肠神经前体细胞的增殖情况,通过分化培养基诱导检测肠神经前体细胞的分化情况.结果 培养第2天出现神经球,经过4次全换液,免疫学鉴定显示(96.85±0.5357)％细胞为Nestin/p75双阳性.lipo2000,RNAimax,慢病毒这三种转染方式中仅慢病毒方法的转染效率最高,能显著提升mmu-miR-346表达水平(差异倍数:117.45).EdU阳性率与TuJ1阳性率分别从阴性对照组的(17.87±1.13)％和(24.87±0.6)％降至转染组的(6.73±0.43)％与(11.90± 0.85)％,两组在增殖与分化中的差异均具有统计学意义(P＜0.0001;P＜0.001).结论 通过分离消化E16.5小鼠肠道可以建立小鼠肠神经前体细胞培养和纯化的方法,慢病毒方法在肠神经前体细胞的转染效率最高,能成功进行增殖与分化实验,可以为肠神经系统发育和疾病的研究奠定基础.

关键词：先天性巨结肠、肠神经系统、转染

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资助基金：国家自然科学基金项目81370473,81570467;江苏省“青蓝工程”项目;Natural Science Foundation of China81370473,81570467;Jiangsu Province Blue Project

在线出版日期：2018-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：64-70