小鼠跨胎盘RNA干扰EphB2基因在先天畸形中的实验研究

摘要：

目的 应用跨胎盘RNA干扰技术抑制胚胎鼠EphB2基因,探索研究易感基因在先天性畸形中的作用.方法 构建先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)相关易感基因EphB2下调质粒SiEphB2,设计3个不同位点SiEphB2,通过鼠尾静脉向孕鼠注射SiEphB2质粒,空载体及Ringer's液.孕鼠在孕9.5d注射,48 h后取出胚胎,应用实时定量PCR及Western blotting 检测EphB2基因在子代鼠的mRNA和蛋白质表达水平.并观察新生鼠的肛门直肠发育情况.结果 在mRNA水平,发现SiEphB2载体注射组(SiEphB2组)EphB2基因表达比较空载体注射组(Vector组)及释液注射组(Ringer's组)明显降低.Ringer's组均值为0.99±0.06,Vector组为0.87±0.07;SiEphB2组中,SiEphB2-1组均值为0.27±0.03,SiEphB2-2组为0.34±0.04,SiEphB2-3组为0.42±0.02.SiEphB2组胚胎EphB2基因较Ringer's组和Vector组分别下调(65.3±6.6)％和(60.6±8.6)％,差异有统计学意义(P＜0.05).在蛋白质水平,Ringer's组为1.00±0.05,Vector组为0.93±0.09;SiEphB2组中,SiEphB2-1组为0.20±0.03;SiEphB2-2组为0.33±0.02;SiEphB2-3组为0.39±0.02.SiEphB2组胚胎EphB2基因较Ringer's组和Vector组分别下调(69.3±7.8)％和(66.9±9.6)％,差异有统计学意义(P＜0.05).大体观察SiEphB2组胎鼠可见肛门及鼠尾发育,矢状位切片HE染色未见ARM发生.结论 胚胎鼠早期跨胎盘RNA干扰是研究基因功能现实可行的研究方法,跨胎盘SiEphB2可下调子代鼠基因.

关键词：RNA干扰、基因、抑制、畸形

所属期刊栏目：36

分类号：R714.53;R445.1;R682.1

资助基金：国家自然科学基金;辽宁省教育厅科学技术研究一般项目

在线出版日期：2015-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：656-660