10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2015.08.017
PI3K/AKT信号通路在一氧化氮对肠神经干细胞增殖分化中的作用
目的 通过抑制PI3K/AKT信号通路,探讨该信号通路在一氧化氮对体外培养的大鼠肠神经干细胞增殖、分化的调控情况.方法 从孕15d胚鼠肠道提取肠神经干细胞,传代后的肠神经干细胞分为LY294002(25 μmol/L)组、LY294002(50μmol/L)组及空白对照组,培养48 h后,形态学观察分析各组的神经球大小情况,流式细胞仪检测各组肠神经干细胞nestin、BrdU标记的增殖细胞、子代细胞神经元Tuj-1染色阳性细胞百分比;传代后的肠神经干细胞分为50 μmol/l DETA/NO+ 20 ng/ml EGF组、100 μmol/L L-NAME+ 20 ng/ml EGF组及空白对照组(20 ng/ml EGF),培养1 h后,利用Western Blot法检测及gel-pro图像软件分析各组P-AKT磷酸化水平.结果 形态学观察发现LY294002(50 μmol/L)组神经球较小、部分细胞有退化现象、LY294002 (25 μmol/L)组次之、空白对照组神经球较大;流式检测发现LY294002 (25 μmol/L)组与空白对照组相比,肠神经干细胞nestin百分比显著降低[(18.42±1.22)%比(27.44±1.08)%,(P<0.05)],BrdU标记的增殖细胞百分比显著降低[(2.20±0.30)%比(12.27±0.59)%,(P<0.05)],神经元Tuj-1百分比显著增加[(17.23±0.78)%比(13.98±0.53)%,(P<0.05)];而LY294002(50 μmol/L)组与空白对照组相比,肠神经干细胞nestin百分比[(8.77±0.90)%比(27.44±1.08)]、BrdU标记的增殖细胞百分比[(0.62±0.03)%比(12.27±0.59)]及神经元百分比[(9.88±1.22)%比(13.98±0.53)%]差异均有统计学意义(P<0.05).Western Blot法检测发现100 μmol/L L-NAME+ 20 ng/ml EGF组pAKT磷酸化的程度显著增强[(15.71±1.09)%比(39.42±1.02)%,P<0.05],50 μmol/l DETA/NO+ 20 ng/ml EGF组显著降低[(58.44±1.73)%比(39.42±1.02)%,P<0.05].结论 一氧化氮能抑制肠神经干细胞增殖、促进其向神经元分化,其作用机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关.
干细胞、细胞增殖、细胞分化、磷脂酰肌醇3-激酶
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R711.31;R392.12;R285.5
浙江省自然科学基金;浙江省医药卫生平台研究计划重点项目;温州市高层次人才创新技术重点项目
2015-10-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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626-631