CO2对腹膜间皮细胞分泌功能影响的实验研究

摘要：

目的 本实验研究CQ对腹膜间皮细胞分泌功能的影响,探讨其在腹腔局部免疫中的作用.方法 腹腔灌洗分离培养C57BL/6J小鼠腹膜间皮细胞.间皮细胞纯化通过细胞形态学及免疫组织化学方法(小鼠间皮细胞角蛋白特异性抗体AE1/AE3)鉴定.间皮细胞培养板中分别加入脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)或磷酸盐缓冲液(PBS),孵育6及24 h后分别收集上清液.ELISA测定白细胞介素-6(IL-6)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、单核细胞趋化蛋白1 (MCP-1)及正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)含量.间皮细胞培养板中分别加入LPS或TNF-α,暴露于100％ CO2或5％ CO中4h,暴露后即刻、6、10及24 h收集上清液.ELISA测定IL-6、G-CSF及M-CSF含量.MTT实验确定细胞活力.结果 间皮细胞可以分泌基础产量的G-CSF、IL-6、M-CSF、MCP-1及RANTES.LPS及TNF-α刺激6h后间皮细胞分泌G-CSF产量明显增加,分别为(1627.08±688.73) pg/ml及(1118.07±740.62) pg/ml; 24 h后分别为(7874.76±1770.77) pg/ml及(1695.91±128.55) pg/ml;与对照组(170.49±98.35) pg/ml及(503.03±255.78) pg/ml比较,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).刺激24 h后LPS及TNF-α刺激组间皮细胞分泌IL-6明显增加,分别为(795.08±716.48) pg/ml及(600.70±526.23) pg/ml,与对照组(102.13±93.86) pg/ml比较,差异有统计学意义(P＜0.05).100％ CO2暴 露后即刻,LPS刺激组及TNF-α刺激组的G-CSF产量均受到抑制,分别为(14.67±3.18) pg/ml及(11.67±2.40) pg/ml,与5％ CO暴露组”(1047.36±311.41) pg/ml及(168.59±37.78) pg/ml”比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与5％ CO2暴露组(4.26±2.85) pg/ml相比,IL-6产量于LPS刺激组受抑,为(0.30±0.12)pg/ml,组间差异有统计学意义(P＜0.05).24 h后,100％ CO2与5％ CO暴露组G-CSF基本一致,LPS刺激组为(7874.76±1770.77) pg/ml及(5499.04±1757.19) pg/ml,TNF-α刺激组为(1695.91±l025.81) pg/ml及(2894.44±1645.26) pg/ml.LPS刺激后4 h(5％/100％ CO2暴露后即刻)的间皮细胞线粒体活动,分别为0.82±0.03及0.51±0.04,差异有统计学意义(P＜0.0001).TNF-α刺激后4、10h的间皮细胞线粒体活动,5％ CO下分别为0.82±0.03及0.51±0.04(P＜0.0001),100％CO2下分别为0.95±0.03及0.64±0.03(P＜0.0001),24 h后无明显差别.结论 静息状态下间皮细胞可产生细胞因子及趋化因子,这一分泌功能可被外源及内源性刺激物刺激,CO2暴露可对间皮细胞代谢功能产生暂时的抑制作用.

关键词：气腹,人工、细胞、免疫

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在线出版日期：2014-02-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：695-699