β-catenin特异性siRNA转染肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1对细胞增殖的影响

摘要：

目的 采用RNAi技术抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin基因(CTNNB1)的表达,观察对肾母细胞瘤细胞株SK-NEP-1细胞增殖的影响,并检测通路下游相关基因及β-catenin蛋白表达水平的变化及意义.方法 将两种不同序列β-catenin特异性siRNA瞬时转染到SK-NEP-1细胞中,实验分为4组:未转染组(UT)、阴性对照组(NS)、siRNA1组(S1)、siRNA2组(S2),分别在转染后的0、24、48、72 h用CCK-8试剂盒检测比较各组光吸收度值(AV)；在转染24 h后检测各组中CTNNB1、CCND1、MYC基因的表达水平；转染48 h后免疫荧光法检测各组中β-catenin蛋白的表达水平.结果 转染优化实验表明,100 nmol/L的β-catenin特异siRNA1和siRNA2均可获得有效抑制效应.瞬时转染24 h,UT组的AV值(0.62±0.03)分别是S1组(0.49±0.02)和S2组(0.50±0.02)的1.25倍和1.23倍(P＜0.01),48 h后UT组的AV值(1.03±0.07)分别是S1组(0.69±0.04)和S2组(0.72±0.03)的1.48倍和1.43倍(P＜0.01),转染组细胞增殖明显受到抑制.转染24h后S1和S2组CTNNB1的mRNA水平分别被敲减了67％和73％,S1、S2组与UT组比较,下游基因CC-ND1、MYC的mRNA表达水平也明显降低,CCND1组间比较P＜0.01；MYC组间比较P＜0.05,而UT组与NS组比较,CTNNB1、CCND1、MYC基因的P值均＞0.05.转染48 h后,积分光密度/面积(IOD/Area)值分析比较各组β-catenin荧光强度,S1组(0.50±0.36)、S2组(0.58±0.20)较UT组(2.06±0.30)、NS组(2.03±0.53)明显减少,P＜0.01.结论 瞬时转染β-catenin特异性siRNA能抑制SK-N EP-1细胞的增殖,使细胞中β-catenin蛋白的表达降低,Wnt/β-catenin信号通路下游相关基因MYC及CCND1表达下调.β-catenin是肾母细胞瘤分子靶向治疗的一个潜在新靶点.

关键词：β-catenin、siRNA、SK-NEP-1、肾母细胞瘤

所属期刊栏目：33

分类号：R692(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)

资助基金：上海市科委自然科学基金05ZR14020

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：139-143