腺病毒介导多药耐药基因1保护骨髓的体外实验研究

摘要：

目的 构建表达多药耐药基因1(MDR1)的重组腺病毒载体,体外实验研究MDR 1基因对骨髓的保护作用.方法 用基因工程技术将MDR 1的cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV上,利用PAdEasy系统进行细菌内同源重组,然后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293细胞,并在其中包装、扩增、收获病毒.进一步采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度进行检测.将收集的重组腺病毒Ad5-MDR 1感染小鼠单个核细胞,通过荧光显微镜、免疫组化及流式细胞仪对感染效率及保护作用进行检测,并用Western b1ot法检测P-gp的表达.结果 酶切鉴定及PCR结果证明多药耐药基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达8.3×1011pfu/ml.对小鼠单个核细胞的感染效率可达10%～15%,转染小鼠单个核细胞48 h后,有P-gp蛋白的明显表达.结论 成功构建了表达MDR 1的重组腺病毒载体,证实MDR转染对骨髓具有保护作用.

关键词：多药耐药性基因1、腺病毒科、骨髓

所属期刊栏目：28

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30330590

在线出版日期：2007-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：59-63