绵羊整联蛋白受体av亚基基因实时定量PCR标准曲线的构建

摘要：

目的为了建立检测绵羊整联蛋白受体0lv亚基基因（ITGAV）mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法，构建目的基因ITGAV、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线。方法根据GeneBank中绵羊ITGAV和β-actin基因编码区保守序列，设计特异引物。选择绵羊卵巢组织cDNA为模板进行PCR扩增．产物回收纯化后，与PMD18-T载体连接、转化感受态DH5α，筛选白色茵落并摇茵培养，经PCR和测序鉴定获得阳性ITGAV、β-actin重组质粒；将阳性重组质粒107—102梯度稀释作为模板，进行实时荧光定量PCR。系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果ITGAV基因相关系数（RSq）=0．998，扩增效率（Eff）=104．7％；β-actin基因相关系数（RSq）=0．998，扩增效率（Em）=111．6％。经熔解曲线分析，ITGAV基因熔解温度为84．66℃，β-actin为86．92℃，2个基因片段的熔解曲线均呈单峰，扩增曲线呈典型的S型动力学曲线．指数扩增期和平台期十分明显，表现为理想的扩增曲线。结论成功构建目的基因ITGAV、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线。

关键词：ITGAV：Real-time、PCR绵羊标准曲线

分类号：S811.3(普通畜牧学)

在线出版日期：2012-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：38-40