重组人唾液淀粉酶A的制备及活性鉴定

摘要：

目的 利用基因工程制备重组人唾液淀粉酶A(rSAA),用其替代唾液中的SAA水解淀粉.方法 设计一对带酶切位点的引物,PCR扩增SAA cDNA全长,将pET-28a质粒和PCR产物双酶切、连接.连接产物热激法转化大肠杆菌DH5α,于含卡那霉素的LB平板筛选抗性菌落,培养抗性菌落,抽提质粒,进行酶切和测序鉴定.将重组质粒(记为pS1)转化大肠杆菌BL21(DE3),用含卡那霉素的LB平板筛选抗性菌落(记为BL-pS1),培养BL-pS1,ITPG诱导rSAA表达.收集菌体,重悬于pH6.8的磷酸缓冲液,超声裂解,离心取上清,测试其水解淀粉的活性.结果 构建了 SAA cDNA的原核表达载体pS1,rSAA在宿主菌BL21(DE3)中获得可溶性表达,rSAA能高效水解淀粉.结论 用rSAA取代唾液中SAA水解淀粉操作安全、取用方便、利于环保.

关键词：唾液淀粉酶A、pET-28a质粒、淀粉

所属期刊栏目：35

分类号：Q787(基因工程（遗传工程）)

资助基金：湖北省大学生课外创新项目;湖北科技学院教学改革项目

在线出版日期：2021-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：292-294,封3