重组溶瘤2型单纯疱疹病毒荧光定量PCR检测方法的建立与验证

摘要：

目的 为了建立高效、敏感的针对重组溶瘤2型单纯疱疹病毒(oHSV2)的荧光定量PCR方法.方法 依据oHSV2的基因序列,登录Beacon Designer 8.0软件设计引物,提取前期已重组好的阳性质粒pHG52d34.5CMVhGM-CSF,测定浓度并换算后梯度稀释为荧光定量PCR的模板,进行PCR反应.结果 经过多次调整实验的反应条件和反应体系,熔解曲线为单一峰,该病毒与野生型Ⅰ型单纯疱疹病毒、野生型Ⅱ型单纯疱疹病毒等没有交叉反应.oHSV2最低检测限为1000 copies/μL,R2可达0.997,批内及批间变异系数分别为0.357％ ～1.156％和1.06％ ～3.35％,体液(血液)中预加的oHSV2的回收率为96.6％ ～ 109.3％.结论 成功建立了oHSV2的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,可特异而灵敏地检测血浆中的oHSV2.

关键词：重组溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒、qPCR、建立

所属期刊栏目：34

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2020-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：102-104,封3