限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达

摘要：

在已知基因序列但缺乏 DNA 模版的情况下，人工设计合成多条引物，采用重叠 PCR 技术体外人工合成899 bp的MluⅠ基因和1312 bp的M.MluⅠ基因.并将合成的MluⅠ基因连接到表达载体 pet30a上，重组表达载体构成 pet30a-MluⅠ，将M.MluⅠ基因连接到表达载体 PUC19上，重组表达载体构成 PUC19-M.MluⅠ.测序结果显示，载体构建成功后利用体外重组转化技术，将pet30a-MluⅠ和PUC19-M.MluⅠ转入T7 expression E.coli表达菌株中.重组工程菌经 IPTG诱导，用 SDS-PAGE鉴定，发现限制性内切酶 MluⅠ成功表达.该酶的成功表达不仅为后续研究提供了材料，而且为实验室制备限制性内切酶在方法上开辟了新的途径，为更多新发现的内切酶基因的成功克隆提供了参考.

关键词：限制性内切酶、MluⅠ基因的合成、基因克隆、基因表达

所属期刊栏目：41

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：苏州工业园区服务外包职业学院教研教改研究课题JG 201601

在线出版日期：2016-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：46-53