黄沙鳖β-防御素Hs-BD1的原核表达及抗菌活性检测

摘要：

[目的]构建黄沙鳖β-防御素1(Hs-BD1)原核表达并分析其抗菌活性,为深入分析Hs-BD1的生理功能及开发新型黄沙鳖抗菌药物提供理论依据.[方法]构建Hs-BD1成熟肽序列的重组表达载体pCold-TF-Hs-BD1,采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白rHs-BD1表达,以十二硫酸酯钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blotting)检测重组蛋白rHs-BD1的表达情况.采用Ni柱亲和层析法对重组蛋白rHs-BD1进行纯化,分析其对几种革兰氏阳性和阴性菌的抑菌活性、溶血性和抗氧化能力.[结果]SDS-PAGE检测结果显示,重组蛋白rHs-BD1在电泳凝胶约58.1 kDa处出现特异性条带,其分子量大小与预测值相符.经Western blotting检测,重组蛋白rHs-BD1可与Anti-6×His Tag抗体发生特异性反应,表明Hs-BD1基因在原核表达系统成功表达,经纯化的重组蛋白rHs-BD1含量为400.0 μg/mL.对已纯化的重组蛋白rHs-BD1进行体外抗菌活性检测,结果显示其对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)HPG1和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)HPN1的最小抑菌浓度(MIC)为40.00μg/mL,对大肠杆菌(Escherichia coli)YLG1、类志贺邻单胞菌(Plesiomons shigelloides)DAL1 和迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)FCH1的MIC为20.00 μg/mL,表明重组蛋白rHs-BD1对一些革兰氏阳性和阴性菌具有较强的抗菌活性.20.0、40.0、60.0和80.0 Ng/mL重组蛋白rHs-BD1对新鲜黄沙鳖血细胞的溶血率分别为1.5％、2.7％、3.3％和4.2％,20.0、40.0、80.0和120.0 μg/mL重组蛋白rHs-BD1对1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)自由基的清除率分别为2.6％、5.2％、11.6％和17.0％.[结论]经原核表达获得的Hs-BD1重组蛋白rHs-BD1具有一定的广谱抗菌活性和抗氧化能力,且溶血作用较弱,对黄沙鳖机体毒副作用较低,可用于新型黄沙鳖抗菌药物开发.

关键词：黄沙鳖、β-防御素、原核表达、抗菌活性

所属期刊栏目：35

分类号：S947.1(水产保护学)

资助基金：广西自然科学基金项目;广西农业农村厅水产养殖病害测报项目

在线出版日期：2022-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1967-1976