从江香猪睾丸支持细胞分离培养与鉴定

摘要：

[目的]建立一种高效制备从江香猪睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)体外分离培养方法,为后续香猪雄性繁殖研究提供细胞材料,为同类小型香猪支持细胞的分离培养提供参考.[方法]采用0.1％Ⅳ型胶原酶和0.25％胰酶-EDTA组合酶消化法消化睾丸组织,差速贴壁法纯化支持细胞,使用含10％胎牛血清完全培养基培养支持细胞,观察其形态特征并记录生长曲线,经苏木精—伊红(HE)染色、RT-PCR及免疫荧光染色进行支持细胞的鉴定.[结果]组合酶法消化后可获得大量生精上皮细胞混悬液,刚分离的支持细胞呈圆形或椭圆形,分离培养5～6 h后SCs贴壁,贴壁后细胞形态呈梭形或不规则形,培养3～4 d后细胞之间呈紧密连接,可清晰观察到细胞核及细胞质中的颗粒状物质或小空泡;SCs分离后1～2 d增殖速度缓慢,培养3～6 d细胞增殖速度加快,活性增强,进入对数生长期,培养7～8 d后细胞增殖速率下降,原代支持细胞生长曲线呈S形;HE染色显示SCs细胞核为深紫色,细胞质呈淡红色;RT-PCR结果显示支持细胞特异性基因WT1、SOX9均表达;免疫荧光染色结果显示特异性基因GATA-4抗体免疫阳性率达90％以上.[结论]成功建立从江香猪睾丸支持细胞的原代培养方法.

关键词：睾丸支持细胞、分离培养、鉴定、从江香猪

所属期刊栏目：35

分类号：S811.4(普通畜牧学)

资助基金：贵州省科学技术基金;贵州省科学技术基金重点项目

在线出版日期：2022-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1948-1953