非洲猪瘟病毒衣壳五邻体顶点蛋白(H240R)原核表达及免疫原性研究

摘要：

[目的]原核表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)次要衣壳五邻体顶点蛋白(H240R),并研究其免疫原性.[方法]运用生物信息学软件初步预测分析H240R蛋白的理化性质、二级和三级结构.目的基因序列密码子优化后全基因合成,利用基因重组技术构建重组载体pET28 a/H,通过原核系统表达目的蛋白,筛选最优的诱导温度和诱导时间.目的蛋白(包涵体)通过含2M尿素洗涤缓冲液洗涤和亲和层析进行纯化.利用梯度透析对纯化的目的蛋白进行复性,Western和Dot-ELISA鉴定复性的目的蛋白.复性蛋白和佐剂ISA201乳化后免疫小鼠,评价H240R蛋白免疫原性及其在小鼠体内诱导的抗体消长规律.[结果]生物信息学分析显示H240R蛋白分子量约为27 kDa,等电点为9.40,无跨膜结构域,抗原指数较高.成功构建大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)/pET28a/H,在不同温度诱导条件下H240R蛋白均以包涵体形式表达.包涵体蛋白经过洗涤和亲和层析纯化后,纯度达85％以上.大约65％纯化蛋白可通过梯度透析进行复性.Western显示His抗体可以和融合蛋白结合显色,表明目的蛋白表达正确,Dot-ELISA显示阳性血清和复性的目的蛋白反应,表明复性的H240R蛋白具有正确的构象.复性蛋白免疫小鼠后,可刺激小鼠产生抗体,二免后10 d达到平台期,可以稳定持续30 d左右.[结论]ASFV衣壳五邻体顶点蛋白H240R在原核系统中以包涵体形式表达,纯化复性的目的蛋白具有良好的免疫原性,并且可以和阳性血清反应.这些可为进一步研究H240R蛋白的结构和功能,以及ASFV亚单位疫苗研制提供参考和思路.

关键词：非洲猪瘟病毒;衣壳蛋白;五邻体顶点蛋白H240R;包涵体

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分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南中医药大学博士科研启动经费项目RSB-SJJ2018-09

在线出版日期：2021-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2038-2044