根癌农杆菌介导荸荠秆枯病菌转化体系构建及突变体筛选

摘要：

[目的]建立农杆菌介导荸荠秆枯病菌(Cylindrosporium eleocharidis)的遗传转化体系,构建该病菌的突变体库并进行突变体筛选,为荸荠秆枯病病原菌的分子机理研究提供参考依据.[方法]运用农杆菌介导的真菌转化方法,将含有绿色荧光蛋白(GFP)的双元载体pEX4转化至荸荠秆枯病菌野生型菌株Ceh中,利用PCR、Southern blotting杂交和荧光显微镜检测等技术验证转化子.通过单因子变量[共培养基中的乙酰丁香酮(AS)、农杆菌诱导时间、病原菌孢子浓度、IM诱导培养基pH、共培养时间和共培养介质]试验,优化农杆菌遗传转化体系,并建立该病菌突变体库,分析突变体的形态变异和致病性.[结果]获得的最佳遗传转化条件为:共培养基中AS浓度为300 μmol/L,农杆菌诱导时间6h,真菌孢子浓度为107个/mL,诱导培养基pH5.6,共培养时间72 h,共培养介质为硝酸纤维素膜.在该优化条件下,农杆菌遗传转化体系转化效率达600 ～700个转化子/107个孢子.随机挑取转化子进行PCR检测均为阳性,T-DNA单拷贝插入率达77.8％,荧光显微镜均可检测到荧光信号.[结论]成功构建了农杆菌介导的荸荠秆枯病病原菌遗传转化体系和T-DNA插入突变体库,并筛选获得表型和致病性缺陷突变体,可用于指导荸荠秆枯病菌基因功能和病菌与寄主互作研究.

关键词：荸荠、秆枯病、农杆菌、遗传转化体系

所属期刊栏目：33

分类号：S435.661(病虫害及其防治)

资助基金：广西科技重大专项;广西自然科学基金项目;广西农业科学院基本科研业务专项

在线出版日期：2020-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1696-1702