小立碗藓PpCASLUU3基因敲除载体的构建

摘要：

[目的]为探明PpCASLUU3是否参与灰霉菌引起的小立碗藓中类过敏反应,构建PpCASLUU3-PTN182敲除载体,对早期登陆植物防卫防御的进化提供依据.[方法]根据同源重组的原理,以小立碗藓基因组DNA为模板,利用Primer 5设计的引物,扩增得到小立碗藓PpCASLUU3基因的上、下游同源臂基因片段.将上下游同源臂基因分别克隆到pMD-19T上,测序验证,使用EcoRI、EcoR V酶切合上游目的基因的pMD-19T获得上游目的基因片段,使用BamH Ⅰ、Sma Ⅰ酶切含下游目的基因的pMD-19T获得下游目的基因片段,同时酶切PTN182载体,经T4-DNA连接酶连接,转入大肠杆菌感受态,筛选出阳性克隆,采用相同的方法,将下游臂连入PpCASLUU3.1-PTN182载体.[结果]经PCR检测、酶切验证,获得了完整的PpCASLUU3.1-PTN182-PpCASLUU3.2敲除载体.经测序分析,插入序列PpCASLUU3.1和PpCASLUU3.2与未插入前相似度分别为100％和99.63％.[结论]PpCASLUU3-PTN182敲除载体构建成功.

关键词：小立碗藓、PpCASLUU3基因、PTN182、载体

所属期刊栏目：33

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目“灰霉菌胁迫下小立碗藓的转录组分析及重要抗病基因鉴定”31560508

在线出版日期：2020-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：32-39