利用CRISPR/Cpf1系统构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的293T细胞株

摘要：

[目的]基于CRISPR/Cpf1(AsCpf1/LbCpf1)技术构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的人胚肾细胞(HEK293T)稳定细胞株,旨在研究ABCG1和ABCG4基因的生物学功能.[方法]针对ABCG1和ABCG4基因作用的功能域,设计2对靶向ABCG1和ABCG4基因前7个外显子的sgRNA序列,分别克隆到AsCpf1和LbCpf1的载体上.将测序验证正确的重组质粒转染到HEK293T细胞中,T7E1酶切和测序验证敲除效率,对敲除成功的293T细胞利用有限稀释法筛选获得基因双突变的敲除细胞株,对其基因组进行PCR扩增并双向测序验证编辑结果,选择有正确编辑结果的PCR产物进行TA克隆,进而测序验证单克隆细胞株编辑效率.[结果]结果获得敲除ABCG1和ABCG4基因的稳定细胞株各1株(AsCpf1-ABCG1-sgRNA 1-1和LbCpf1-ABCG4-sgRNA 2-1).[结论]通过利用新型基因编辑技术CRISPR/Cpf1系统,获得了永久性敲除目的细胞靶基因的细胞株,可为进一步探索和证实ABCG1和ABCG4在细胞中胆固醇代谢和调节作用提供帮助.

关键词：CRISPR/Cpf1、ABCG1、ABCG4、基因敲除、稳定细胞株

所属期刊栏目：32

分类号：R393

资助基金：重庆市重大项目cstc2016shms-ztzx80016;苏州市高职高专院校教改项目2017SZJG015;苏州工业园区服务外包职业学院科研项目ky-xjy703

在线出版日期：2019-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：741-750