水体中根肿菌孢子实时荧光定量PCR检测体系的建立

摘要：

[目的]十字花科作物根肿病是一种世界性病害,早期准确定量检测病原是实现有效防控的基础,研究旨在建立一种应用于水体中检测根肿菌的实时荧光定量PCR方法.[方法]采用近年已研究并发表的一对引物.建立并优化RT-PCR反应体系,利用大肠杆菌TG-1、大肠杆菌T1-1、大肠杆菌DH5α、肺炎克雷伯菌E3、枯草芽孢杆菌XF-1、解淀粉芽孢杆菌Y2、柑橘黄龙病病原菌、假单胞菌E12、成团泛菌L9、阴沟肠杆菌C6、荧光假单胞菌df等11种病原物进行RT-PCR特异性检测,并对灵敏度、可重复性进行评价.利用该体系分别检测不同接种浓度的水体中的根肿菌.[结果]得出标准曲线的回归方程为Y=-3.452X+35.118,其回归系数R2 =0.996,扩增曲线在1×101 ～1×107拷贝/μl范围内,具有较好的线性关系,扩增效率94.833％,相邻扩增曲线间距均匀,1×101拷贝/μl为最低检测值.熔解曲线显示,所有产物具有单一峰形,有高度扩增特异性.重复性试验变异系数小于1％.在人工接种的水体中,检测下限至少为102个孢子/mL.[结论]建立的实时荧光定量PCR方法具有快速、特异、敏感和稳定等优点,为检测根肿菌在水体中的含量提供了技术方法.

关键词：十字花科、根肿菌、水体、荧光定量PCR技术

所属期刊栏目：32

分类号：S435(病虫害及其防治)

资助基金：国家自然科学基金31560503

在线出版日期：2019-04-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：104-109