肝片吸虫SAP-2蛋白的基因克隆、表达及其诊断潜力初步评估

摘要：

[目的]为了研究肝片吸虫(Fh) SAP-2蛋白的反应原性及作为Fh血清学诊断抗原的潜力.[方法]本研究利用RT-PCR方法对Fh SAP-2基因进行扩增,将扩增产物克隆入pMD19-T载体后测序,对其进行分子特征分析;构建原核表达载体pET-SAP-2,在E.coli BL21(DE3)中进行表达,通过SDS-PAGE和Western blot对表达的重组蛋白进行反应原性分析;以纯化的重组蛋白SAP-2(reSAP-2)为抗原,建立了检测Fh特异性抗体的间接ELISA,评估了SAP-2蛋白作为Fh血清学诊断抗原的潜力.[结果]Fh SAP-2基因全长306 bp,编码101个氨基酸.在线软件分析发现,SAP-2为疏水性、无跨膜区蛋白,信号肽位于第1～15个氨基酸之间.系统进化树分析表明,FhSAP-2与曼氏裂体吸虫同源性最高,与其他寄生虫存在较大的差异.Western blot证实,reSAP-2蛋白可被Fh阳性血清特异性识别,有较强的反应原性.用reSAP-2蛋白建立了间接ELISA,对23份Fh阳性血清和10份阴性血清进行检测,结果证实reSAP-2蛋白有良好的特异性和敏感性.[结论]Fh SAP-2蛋白具有较强的反应原性,具有作为Fh血清学诊断抗原的潜力.

关键词：肝片吸虫、SAP-2基因、原核表达、间接ELISA、诊断潜力

所属期刊栏目：31

分类号：S852-7(动物医学（兽医学）)

资助基金：十三五国家重点研发计划2017YFD0501200;兵团国际科技合作项目2016AH006

在线出版日期：2019-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2704-2709