蝴蝶兰2种病毒的同步检测及其CP融合反义表达载体构建

摘要：

[目的]建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)是侵染蝴蝶兰最主要的2种病毒,给蝴蝶兰产业造成巨大经济损失.本文建立了快速检测这2种病毒的方法,并为培育同时抗CyMV和ORSV的蝴蝶兰新品种奠定基础.[方法]根据2种病毒CP基因序列设计了2对特异性引物,运用RT-PCR方法同时检测这2种病毒,利用反义RNA技术构建2种病毒CP基因的融合表达载体.[结果]利用设计的特异性引物检测12株蝴蝶兰样品,有25％同时检测出2种病毒,在同一PCR反应体系中,扩增出2个目的条带清晰无杂带.从感病蝴蝶兰叶片总RNA中克隆出CyMV CP基因的125 bp片段和ORSV CP基因的164 bp片段.将CyMV的CP基因片段以3’→5’方向与表达载体pCAMBIA1300连接,命名为pCAMBIA1300-CyMV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得125 bp的小片段;再将ORSV的CP基因片段以3’→5’方向与pCAMBIA1300-CyMV连接,命名pCAMBIA1300-CyMV-ORSV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得289 bp的片段.[结论]所设计的2对特异性引物能够在同一PCR体系中快速高效地检测出CyMV和ORSV,含2种病毒CP基因的反义融合表达载体构建成功.

关键词：蝴蝶兰、建兰花叶病毒、齿兰环斑病毒、外壳蛋白基因、融合反义基因

所属期刊栏目：31

分类号：Q949.71(植物学)

资助基金：郑州师范学院科技创新团队支持计划;郑州市科技攻关项目“蝴蝶兰新品种选育研究”141PPTGG420;河南省科技攻关项目“珍奇类蝴蝶兰新品种选育”162102110073;河南省产学研合作计划项目“观赏、药用兰花新品种选育及种苗繁育”152107000071

在线出版日期：2018-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1622-1627