细粒棘球蚴Eg HSP20蛋白基因的分子特征、表达及其反应原性研究

摘要：

[目的]本文构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)HSP20基因的重组表达载体并表达、纯化重组蛋白,研究其反应原性.[方法]根据GenBank中Eg HSP20蛋白基因cDNA序列设计特异性引物,以细粒棘球蚴Eg头节总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,将PCR产物克隆至pMD19-T载体,测序验证后,将Eg HSP20抗原基因亚克隆至表达载体pET-32a中,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞内,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析.[结果]Eg HSP20 cDNA全长945个核苷酸,编码314个氨基酸.该多肽含有1个N端糖基化位点,1个CAMP磷酸化位点,5个PKC磷酸化位点,10个CKⅡ磷酸化位点;抗原表位区集中在39～ 53位和120～168位.SDS-PAGE检测显示,重组菌可表达分子量为51 kDa的重组蛋白;Westem blot结果显示,表达的重组蛋白Eg HSP20抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应.[结论]证实Eg HSP20蛋白具有较强的反应原性,为进一步利用Eg HSP20重组蛋白作为Eg感染诊断中候选标识分子奠定了前期基础.

关键词：细粒棘球蚴、Eg HSP20抗原基因、克隆、表达、反应原性

所属期刊栏目：31

分类号：S851.34+7.1.03(动物医学（兽医学）)

资助基金：兵团国际科技合作计划2016AH006;国家国际科技合作交流项目CK07-11;国家农业公益行业专项子课题201303037-5

在线出版日期：2018-09-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1547-1552