绵羊肺炎支原体多抗原表位基因MO-meAg15重组单增李斯特菌的构建及其免疫原性研究

摘要：

[目的]本文研发了MO重组活疫苗.[方法]利用PCR技术从LM-SB5株基因组中扩增出rli60基因上下游同源片段a、6,从pMD19-T-meAg15中扩增出MO meAg15目的片段,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将扩增得到的3个基因片段融合成ameAg15b,将其克隆测序鉴定.将ameAg15b目的基因亚克隆到pKSV7穿梭载体,构建pKSV7-ameAg15b重组穿梭质粒,将该重组穿梭质粒电转化至LM-SB5感受态细胞,在氯霉素、高温双重压力筛选重组菌LM-Δrli60-ameAg15b.[结果]重组菌PCR鉴定表明,外源基因meAg15定点整合于LM基因组中.遗传稳定性试验表明,meAg15基因可以在LM基因组中稳定存在.SDS-PAGE结果表明,重组菌LM-Δrli60-ameAg15b可表达相对分子量为14.5 kDa的重组蛋白;Western blot分析说明,表达的重组蛋白能与MO阳性血清发生特异性免疫反应.[结论]小鼠免疫试验表明,重组菌LM-Δrli60-ameAg15b菌体可诱导机体产生抗MO特异性抗体,证实该重组菌具有一定的免疫原性.

关键词：绵羊肺炎支原体、单增李斯特菌、meAg15基因、同源重组

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分类号：S852(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31360596;国家国际科技合作专项2014DFR31310;兵团中青年科技创新领军人才计划2016BC001

在线出版日期：2017-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2155-2160