小立碗藓GFP-CAD1-PNT182融合基因表达载体的构建

摘要：

[目的]为利用绿色荧光蛋白基因(GFP)的表达情况优化聚乙二醇(PEG)介导的小立碗藓原生质体的转化体系及检测.CAD1基因在细胞中的定位,构建小立碗藓GFP-CAD1-PTN182融合基因表达载体.[方法]用高保真酶获得GFP基因,通过双酶切GFP基因和CAD1-PTN182表达载体,将两片段洗脱回收,然后用T4-DNA连接酶将酶切产物在16 ℃条件下过夜连接.将连接产物转化到E.coli DH5α感受态细胞中,通过凝胶成像电泳的方法,挑选阳性克隆进行验证,并经过酶切验证和测序.[结果]序列对比相似度达100％,表明GFP-CAD1-PTN182融合基因表达载体构建成功.[结论]该载体的成功构建,为PEG介导小立碗藓原生质体转化体系的优化提供了便捷的检测手段,同时为进一步研究CAD1基因在细胞中的定位提供了理论依据.

关键词：GFP、高保真酶、载体构建、基因克隆

所属期刊栏目：30

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金“苔藓植物的类木质素合成及在防御反应中作用的研究”31260426;国家自然科学基金“灰霉菌胁迫下小立碗藓的转录组分析及重要抗病基因鉴定”31560508

在线出版日期：2017-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1975-1980