猪β-防御素cDNA在枯草芽孢杆菌中的高效表达

摘要：

[目的]猪β-防御素(β-defensin)是猪自身分泌的一种能够杀菌、调节免疫功能的小分子抗菌肽,是猪生长繁殖不可缺少的蛋白质.[方法]根据NCBI数据库中的猪防御素cDNA序列,人工合成该基因序列,同时引入相关调控序列及适当酶切位点.酶切该人工合成的DNA后,连接到表达载体pHT43中,然后转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,获得的转化子用于筛选重组表达质粒.将获得的重组表达质粒pHT43-SS-BD转化到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WB800N中,获得基因工程菌株.使用蔗糖诱导基因工程菌表达猪β-防御素,SDS-PAGE鉴定其分子量大小,抑菌试验测定其抑菌活性.[结果]SDS-PAGE电泳结果显示在蔗糖诱导后得到约5 KDa的目的蛋白条带;平板抑菌试验结果表明,蔗糖诱导后的上清液对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑菌效果,而没加蔗糖的对照组上清液无抑菌效果.[结论]该研究实现猪β-防御素cDNA在枯草芽孢杆菌中的高效表达,为解决抗菌肽来源限制及枯草芽孢杆菌的生产应用奠定了技术基础.

关键词：猪β-防御素、基因表达、活性检测、枯草芽孢杆菌

所属期刊栏目：30

分类号：S828(家畜)

资助基金：成都市科技惠民技术研发项目2015-HM01-00176-SF

在线出版日期：2017-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1910-1913