茎瘤芥(榨菜叶)中硫苷酶基因的酶活性研究

摘要：

[目的]异硫代氰酸盐(Isothiocyanates,ITCs)具有抗癌和植物杀虫剂的作用,为解决天然硫苷酶提取复杂、费用昂贵等问题,[方法]本研究采用RT-PCR法扩增硫苷酶的关键基因MYR1,通过构建硫苷酶表达载体,并在毕赤酵母中进行体外诱导表达,以获得外源硫苷酶.将从榨菜叶中提取的总RNA,通过SalI酶切,插入pPIC9K-S表达载体构建重组子.在YPD培养基中菌体悬浮培养至OD600为1左右,更换BMMY培养基进行诱导表达72 h.[结果]提取菌液进行SDS-PAGE电泳检测分析,发现表达蛋白的分子量为90 KDa左右,经诱导表达,Ni柱纯化后,得到纯度为85％的硫苷酶融合蛋白,产率约850 U/L.硫苷酶融合蛋白以sinigrin为底物,运用HPLC测得蛋白的比活力约等于0.003 U/μl.[结论]采用在毕赤酵母中进行体外诱导表达,以获得外源硫苷酶,对硫苷酶活性最佳条件进行筛选和确认,为扩增和签定硫苷酶活性等技术提供重要参考.

关键词：MYR1、硫苷酶、质粒构建、表达

所属期刊栏目：30

分类号：S637.3(蔬菜园艺)

资助基金：重庆市教委项目“茎瘤芥榨菜中硫苷生成异硫氰酸酯酶解条件优化及抗肿瘤的体外试验研究”KJ1601223

在线出版日期：2017-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：744-749