10.16213/j.cnki.scjas.2016.07.008
茶树CsSMT基因的克隆、原核表达及植物超表达载体构建
为了发掘利用茶树(Camellia sinensis)富硒关键酶硒代半胱氨酸甲基转移酶(Selenocysteine methyltransferase,SMT)基因CsSMT,基于宁州2号转录组测序结果,通过RACE克隆该基因的cDNA全长,并通过原核表达和蛋白质印迹(Western blotting)验证该基因,然后构建超表达载体,转化至根癌农杆菌.结果表明:该基因cDNA全长为1277 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为1 050 bp,与NCBI公布的茶树该基因ORF序列有8个点突变,且缺少GTCGTC序列.CsSMT基因编码349个氨基酸,其氨基酸序列与毛果杨、野生大豆、黄芪的SMT以及川桑的同型半胱氨酸-S-甲基转移酶2(Homocysteine-S-methyltransferase2,HMT2)的氨基酸序列有较高的相似性.目标蛋白分子量约38 kDa,为水溶性蛋白,与预测结果相符.成功构建CsSMT基因的超表达载体,并获得携带CsSMT的农杆菌菌株.
茶树、硒、CsSMT、原核表达、超表达
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S571.1
贵州省农业科学院研究生科研创新基金项目“茶树富硒作用关键酶基因CsSMT的克隆与超表达研究”黔农科合创新基金2011006;贵州省体改项目“现代高效农业园区茶叶栽培与加工技术集成示范”[黔科合Z字2013]4008;贵州省农业攻关项目“贵定鸟王茶种质资源的保护及开发利用”[黔科合NY字2011]3046;贵州省农业动植物育种专项“黔茶1号区域适应性高效栽培研究与示范”[黔农育专字2012022号],“贵定鸟王种扩繁和栽培技术集成与示范”黔农育专字2015003
2016-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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