猪繁殖与呼吸综合征病毒山东分离株N蛋白基因的原核表达及其单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(合6×His标签蛋白)的重组N蛋白.将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA检测后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,并对融合细胞上清进行抗体检测,通过有限稀释法,获得了2株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为6D10和3H5,经鉴定后两者均为IgG1型,且识别于不同的抗原位点,经Western-blot和IFA检测,单抗6D10和3H5均能与N蛋白发生特异性反应,与无关蛋白无交叉反应,且均能与PRRSV经典株(VR株)和高致病性变异株(SD-TA株)感染的Marc-145细胞产生特异性反应.

关键词：PRRSV、单克隆抗体、抗原位点、Western-blot、IFA

所属期刊栏目：27

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东出入境检验检疫局科研项目SK201401

在线出版日期：2014-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1772-1776