苜蓿乙醛脱氢酶基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

根据苜蓿基因组ALDH基因和稳定表达Actin基因mRNA序列,设计3对引物.提取苜蓿总RNA,采用oligo dT18作为反转录引物,经反转录获得cDNA,通过优化反应体系及反应条件,建立以苜蓿Aatin基因为内参对照,检测苜蓿乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)基因(a亚基和b亚基)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,苜蓿ALDH基因(a亚基和b亚基)和Actin基因扩增曲线和标准曲线显示其基因扩增效率均大于99.9％,熔解曲线分析表明3个基因的扩增产物为特异性单峰,其Tm分别为(86.4±0.2),(80.6±0.1)和(83.0±0.1)℃.该方法为利用苜蓿Actin基因作为内参基因进行苜蓿ALDH基因的相对定量表达分析提供了方法学基础.

关键词：苜蓿、乙醛脱氢酶、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：27

分类号：S542+.4(饲料作物、牧草)

资助基金：云南省教育厅科学研究基金项目2011C173;国家自然科学基金31160481

在线出版日期：2014-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：413-418