IBDV荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其应用

摘要：

研究根据传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP2基因序列设计了两条引物,通过RT-PCR技术对IBDV的VP2进行扩增,构建IBDV-VP2的标准品质粒,建立基于IBDV-VP2基因的荧光定量RT-PCR检测(QRT-PCR)技术和标准曲线,并检测该QRT-PCR体系的特异性、灵敏度和重复性,最后将该QRT-PCR体系应用于鸡外周血淋巴细胞(PBLs)中IBDV超强毒株(vvIBDV)复制规律以及临床样品的检测.结果表明,建立的QRT-PCR体系特异性好,不能与NDV、IBV及FAV1等发生反应,敏感度为1.51×101拷贝数/μl,扩增效率达1.018,重复性试验组内变异系数和组间变异系数均小于0.5％；在vvIBDV感染后6h收获的细胞含病毒基因组拷贝数最高,对IBD疑似病例的检测敏感度高于套式RT-PCR技术.表明建立的反应体系特异、灵敏度高,并具有很好的稳定性,可应用于病毒复制水平的检测和临床样品的检测.

关键词：鸡传染性法氏囊病、荧光定量RT-PCR、鸡外周血淋巴细胞

所属期刊栏目：26

分类号：S858.31(动物医学（兽医学）)

资助基金：广西青年科学基金项目桂科青0991014;广西自然科学基金项目2012GXNSFAA053060,0728058

在线出版日期：2013-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：798-802