贝类奥尔森派琴虫可视化LAMP检测技术的建立与应用

摘要：

根据环介导等温扩增(LAMP)技术原理,针对奥尔森派琴虫(Perkinsus olseni)的5.8S核糖体RNA与内转录2间隔区序列,设计了6条特异性LAMP扩增引物,分别为两条外引物F3和B3、两条内引物FIP和BIP、两条环引物LF和LB.通过对反应条件的优化,建立了一种适用于贝类奥尔森派琴虫的可视化LAMP检测技术.该技术只对奥尔森派琴虫发生扩增反应,产生黄绿色荧光扩增产物,对其他对照DNA样品无扩增反应,不产生黄绿色荧光.对F3和B3外引物扩增产物进行测序分析,其序列与GenBank中奥尔森派琴虫序列一致,检测结果具有高度特异性.对奥尔森派琴虫质粒DNA的最低检测量为100 fg.用该项LAMP技术与OIE公布的派琴虫PCR检测技术分别对50份分别来自华东及华南沿海地区的牡蛎样品进行检测,同时对PCR阳性样品进行测序分析.结果LAMP检测到2份奥尔森派琴虫,PCR方法检测到9份派琴虫.测序分析结果表明,PCR方法检测到的9份派琴虫阳性样品中有2份为奥尔森派琴虫,其结果与LAMP检测结果相符,说明该技术适用于贝类样品奥尔森派琴虫的检测.

关键词：派琴虫、贝类、LAMP、荧光反应、检测

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分类号：S944.1(水产保护学)

资助基金：国家百千万人才工程人选专项资金项目945200603;广西科技攻关项目桂科攻0630001-3M;广西特聘专家经费资助项目2011B020

在线出版日期：2012-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：302-305