尼罗罗非鱼免疫后外周血白细胞全长cDNA文库的构建及鉴定

摘要：

为大规模快速克隆罗非鱼细胞免疫功能基因,采用SMART技术,构建了尼罗罗非鱼链球菌疫苗免疫后外周血白细胞全长cDNA文库.提取免疫后第3、5和7天外周血白细胞总RNA,用Powerscrip TM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得双链cDNA,经sfiⅠ酶切和CHROMA SPIN-400TM柱分级分离,收集500 bp以上的片段重组于改造的pBluescriptⅡ SK载体并转化大肠杆菌DH5α,测定文库滴度、重组率及库容量.结果表明,构建的cDNA文库原始库容量1.021×106克隆,文库滴度1.078×106pfu/mL,重组率94.71%,插入片段大小0.75-3.0 kb,平均长度约为1.5 kb.随机对24个克隆测序所获得的18条Contigs进行BLASTx分析,发现有15条Contigs有相关同源信忠,其中10条为全长cDNA,全长串为66.7%.说明所构建文库的各项指标均达到要求,可为筛选罗非鱼免疫功能相关基因和进一步研究基因的结构和功能奠定基础.

关键词：尼罗罗非鱼、外周血白细胞、全长cDNA文库、SMART技术

所属期刊栏目：24

分类号：S965.125(水产养殖技术)

资助基金：国家科技支撑计划项目2008BADB9B04;广西科学研究与技术开发计划项目桂科基0836029;2060302社会公益研究项目2060302 GXIF-2008-03,2060302 GXIF-2009-04

在线出版日期：2011-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：329-334