大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在毕赤酵母中的表达及鉴定

摘要：

为了在毕赤酵母中高效表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及研制具有粘膜免疫佐剂活性的无毒重组LTB,采用PCR方法从产毒型大肠杆菌H44815菌株扩增获得LTB完整编码区DNA,将其克隆到酵母表达载体pPIC9K的分泌信号肽基因下游,构建真核表达载体pPIC9K-LTB;重组质粒经核苷酸测序确认并线性化后电转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选转化子,并以小量诱导表达筛选高效表达工程菌株,最后Western blotting分析甲醇诱导上清中的LTB及采用亲和层析和HiTrap Desalting预装柱脱盐纯化蛋白.结果表明,PCR克隆获得的LTB编码DNA序列与GenBank登录DNA序列完全一致,定向插入 pPIC9K载体,可获得表达LTB的酵母分泌表达载体pPIC9K-LTB;电转化后的重组酵母菌KM71诱导表达产物经SDS-PAGE 和Western blotting分析,发现甲醇诱导的培养基上清中含LTB,且具有较好的免疫原性.

关键词：大肠杆菌肠毒素B亚单位(LTB)、基因表达、毕赤酵母、粘膜免疫佐剂

所属期刊栏目：23

分类号：S943(水产保护学)

资助基金：国家科技支撑计划项目2008BADB9B04;2060302社会公益研究2060302 GXIF-2008-03;罗非鱼产业技术体系岗位科学家基金

在线出版日期：2011-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2093-2097