罗非鱼免疫前后白细胞cDNA差减文库的构建及鉴定

摘要：

为筛选罗非鱼链球菌疫苗免疫前后白细胞表达变化基因及探讨鱼类白细胞免疫机理,利用抑制性差减杂交(SSH)技术,以链球菌疫苗免疫前后罗非鱼白细胞cDNA为材料,构建了罗非鱼免疫前后正、负2个cDNA差减文库,并采用地高辛(DIG)标记差减文库cDNA作为探针,进行差异表达片段的筛选鉴定.结果显示:2个文库重组率均在90 %以上,插入片段在300～900 bp,接头连接效率超过50 %,差减效率非常高效,阳性率均超过70 %.杂交筛选后正、负文库各挑选30个阳性克隆进行测序组装聚类,正、负文库各获得16和18条非冗余EST(unigene),所得序列经GenBank同源性分析,正、负文库各有10和11条unigene获得功能注释,且各有6和7条unigene没有同源性匹配,为未知新基因.

关键词：罗非鱼、链球菌、白细胞cDNA、差减文库、抑制性差减杂交(SSH)技术

所属期刊栏目：23

分类号：S965.316(水产养殖技术)

资助基金：国家科技支撑计划项目2008BADB9B04;农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室开放基金项目BZ2007-05;广西科技计划应用基础研究项目桂科基0832029;广西区直属公益性科研院所基本科研业务专项资金项目2060302 GXIF-2009-04

在线出版日期：2010-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1286-1292