萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因序列,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性,人工合成引物,利用PCR重叠延伸法,使编码序列区的部分核苷酸突变,采用嵌套PCR,迅速克隆到目的基因片段Rs-AFPm,连接到pGEM-T easy载体上,转化大肠杆菌XL1菌株,筛选到阳性克隆.序列分析结果表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白,与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码Arg相差两个碱基(CAG→CGA),但二者编码产生相同.重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因分别克隆到pET-21b(+)质粒载体上,导入大肠杆菌BL21菌株.Tricine-SDS-PAGE电泳显示工程菌中存在6KD左右的目的蛋白带;软件分析显示,突变后pETAFPm的表达产物约为突变前pETAFPo表达产物的2倍;抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径.这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效的提高表达量.

关键词：密码偏爱性、PCR定点突变、萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFP2)、表达

所属期刊栏目：15

分类号：S330(作物遗传育种与良种繁育)

资助基金：国家自然科学基金39960065

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：85-89