茶树基因组DNA提纯与RAPD反应系统建立

摘要：

DNA的提取质量是决定RAPD分析成功与否的关键。茶树幼嫩新梢中含有大量的茶多酚等次生物质，采用磨样时添加抗酚类氧化褐变的物质，在细胞核裂解之前去除细胞质中的茶多酚和蛋白质，而后再用改进的DNA微量快速提取法——SDS法分别从不同茶树品种新梢中提取和纯化基因组DNA，所得到的DNA样品适宜于RAPD反应。通过对茶树RAPD分析中影响扩增结果的因素的研究，建立了茶树RAPD的最适反应系统，即在25ul反应体系中，含20-50ng模板DNA，1.5mmol/lMgCl2，各0.1mmol/lDNTPs，0.2umol/L引物和1UTaqDNA聚合酶；扩增程序为：95℃预变性300s，94℃变性60s，35℃退火60s，72℃延伸120s，共进行40个循环，最后72℃延伸600s，这样可以取得较好的扩增效果。

关键词：茶树、基因组DNA、提纯、RAPD、反应系统

所属期刊栏目：14

分类号：Q781(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：99-101