山葡萄C4H基因的克隆表达及遗传转化分析

摘要：

通过生物学技术来研究C4 H基因在山葡萄着色过程中的作用,进而揭示山葡萄果皮着色的分子机理;利用RT-PCR技术克隆了山葡萄C4 H基因的全长cDNA序列,并对该蛋白进行生物信息学分析,预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测C4 H基因在山葡萄8个不同转色时期的表达量,将克隆获得的山葡萄C4 H基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coli BL21(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物.为了验证山葡萄C4 H基因的功能,构建了表达载体pC C4H并转化农杆菌GV3101.用菌液浸泡花序法对拟南芥进行遗传转化,在含50 mg/L Kan的培养基上对T0代种子进行筛选.克隆获得的山葡萄C4 H cDNA全长1735 bp,开放阅读框1518 bp,编码505个氨基酸,该基因表达产物分子质量为57.70 KDa,等电点值9.06.C4 H基因在山葡萄果皮转色各个时期均存在表达;该基因原核表达产物与预期大小一致,表明原核表达成功,拟南芥遗传转化先后得到3个阳性幼苗.对移栽成活的2株抗性植株进行PCR检测为阳性,2株叶片颜色均变成紫红色;经花色素苷质量浓度的测定表明其质量浓度比对照组植株高出3倍.在拟南芥中花色素苷质量浓度虽然较低,但还是能少量合成,说明其花色素苷生物合成途径是开通的,只是积累的量较少.

关键词：山葡萄、克隆、C4H基因、原核表达、遗传转化

所属期刊栏目：41

分类号：Q75(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金项目31260067;吉林省教育厅"十三五"科学技术研究规划项目吉教科合字[2016]第 255 号

在线出版日期：2019-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：11-21