犬弓首蛔虫卵黄原蛋白DUF1943结构域的克隆及原核表达

摘要：

为克隆犬弓首蛔虫 Toxocara canis,T. canis卵黄原蛋白DUF1943结构域(The domain of unknown function 1943,DUF1943)(Tc-duf1943),构建其原核表达载体pET-28a(+)/duf1943,并检测重组蛋白在大肠杆菌 Esche-richia coli,E. coli中的表达形式.该文根据 T. canis的转录组数据,以 T. canis雌、雄虫cDNA为模板扩增 Tc-duf1943,然后与表达载体pET-28a(+)连接,转化 E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导,对目的蛋白的原核表达形式和蛋白质纯化进行鉴定.结果显示 Tc-duf1943序列长度为864 bp,含有一个完整的开放阅读框,编码288个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明,重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量大小约为3.5×104;对表达条件进行优化后,以0.4 mmol/L IPTG,于37 ℃诱导4 h时可获得大量目的蛋白;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化可以获得具有较高纯度的目的蛋白.该试验成功构建了pET-28a(+)/duf1943原核表达载体,为进一步研究 TcDUF1943的生物学功能奠定了基础.

关键词：犬弓首蛔虫、DUF1943、克隆、原核表达

所属期刊栏目：40

分类号：S858.292(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31172313;中央高校基本科研业务费专项资金项目XDJK2016E087

在线出版日期：2018-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：15-20