水牛STAT5a和STAT5b基因启动子克隆及其活性分析

摘要：

为了解转录激活与信号转导因子5(STAT5)在水牛乳腺发育及泌乳生理中的功能,对水牛 STA T5a和STA T5b基因的5′调控区启动子序列进行了克隆,并比较其活性.根据GenBank已公布的牛 STA T5a和STA T5b基因序列设计特异性引物,以广西本地水牛乳腺组织基因组 DNA 为模板,通过 PCR 法分别扩增不同长度STA T5a和STA T5b基因启动子片段并进行生物信息学分析.结果表明:克隆得到的水牛 STA T5a基因启动子片段(P1和P2)大小是500 bp,700 bp,STA T5b基因启动子片段(P3,P4和P5)大小是500 bp,800 bp,1500 bp.在线分析结果显示,仅P2片段中存在高甲基化位点,且富含SP1,AP2等转录因子结合位点.将构建的不同长度启动子片段分别连入pGL3-Basic载体,分别转染水牛乳腺上皮细胞,检测荧光素酶表达水平.与未转染组相比,P1~ P5质粒转染组的荧光素酶比值均显著提高(p<0.05);添加5 mg/mL质量浓度催乳素(PRL)处理乳腺上皮细胞,P3质粒转染组的荧光素酶比值显著高于其他各组(p<0.05).以上结果表明,水牛 STA T5a和STA T5b基因启动子活性均受到PRL调节,两者表达水平在水牛乳腺上皮细胞中不同,且 STA T5b基因表达受PRL调控更为明显.

关键词：水牛、STAT5a、STAT5b、启动子、PRL、活性

所属期刊栏目：40

分类号：S823.8+3(家畜)

资助基金：国家自然科学基金项目31560632;广西自然科学基金项目2016GXNSFDA380030

在线出版日期：2018-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1-8