Let-7a负性调控人肾上皮细胞293T中UHRF1基因的表达

摘要：

目的: 探讨人肾上皮细胞293T中let-7a对靶基因UHRF1的负性调控作用. 方法: 运用生物信息学技术对let-7a靶基因进行预测和分析. 构建含有 UHRF1 3`UTR 全长的野生型(pmiR-RB-UHRF1-3`UTR-wt)和突变型荧光素酶报告质粒(pmiR-RB-UHRF1-3`UTR-mut), 分别将pmiR-RB-UHRF1-3`UTR-wt,pmiR-RB-UHRF1-3`UTR-mut,pmiR-RB-REPORT vector与let-7a mimics或mimics control共转染293T细胞, 双荧光素酶报告系统检测转染后293T 细胞的荧光素酶表达水平. 293T细胞分别转染let-7a mimics和inhibitor, western blot和real-time RT PCR检测UHRF1基因的表达. 结果: 生物信息学结果显示let-7a有48个预测靶基因, 包括UHRF1,HMGA2,MAPK6 等, 主要涉及microRNA在肿瘤、 细胞周期、 PI3K-AKT、 p53等信号通路. 其中UHRF1 3`UTR 含有一个let-7a的结合位点, 且在多个物种中呈高度保守. 进一步双荧光素酶检测发现, 共转染let-7a mimics和pmiR-RB-UHRF1-3`UTR-wt的 293T细胞荧光素酶活性显著降低(p<0.01). Western blot 和real-time RT PCR结果显示转染let-7a mimics的293T细胞 UHRF1表达降低, 而转染let-7a inhibitor的293T细胞UHRF1表达增高. 结论: 人肾上皮细胞293T中let-7a能通过与UHRF13`UTR靶向结合, 负性调控UHRF1的表达.

关键词：微RNA、UHRF1、基因表达

所属期刊栏目：39

分类号：Q813(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金面上项目81270912;重庆市科委一般项目cstc2013jcyjA10044

在线出版日期：2017-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：77-83