苹果属3种检疫性疫霉的四重PCR分子检测

摘要：

为建立苹果属冬生疫霉Phytophthora hibernali、 丁香疫霉P.syringae和栗黑水疫霉P.cambivora 3种检疫性疫霉的同步分子检测方法, 根据疫霉属18S rRNA,ITS,HSP90和Ypt1基因分别设计通用引物, 冬生疫霉、 丁香疫霉及栗黑水疫霉特异引物, 建立了四重PCR检测方法, 并进行了灵敏度和模拟带菌测试. 建立了可同时检测苹果属上冬生疫霉、 丁香疫霉和栗黑水疫霉的特异四重PCR检测体系: 在20 μL反应体系中, 最佳引物浓度组合为10 μmol/L的18SUF/18SUR,PHSF/PHSR,PCSF/PCSR和PSSF/PSSR分别为0.2,0.6,0.8,1.0 μL;最佳退火温度和退火时间分别为63 ℃和20 s. 该体系扩增冬生疫霉出现884 bp的18S rRNA条带和232 bp的ITS基因特异带, 丁香疫霉出现884 bp的18S rRNA条带和683 bp的HSP90基因特异带, 扩增栗黑水疫霉出现884 bp的18S rRNA条带和314 bp的Ypt1基因特异带, 对照菌只出现18S rRNA条带;四重PCR反应体系检测灵敏度低于单重PCR;模拟带菌试验可同时扩增出4个片段. 表明该四重PCR检测方法能实现冬生疫霉、 丁香疫霉和栗黑水疫霉的同步特异检测, 实现苹果属类水果及种苗检疫性疫霉的快速检测.

关键词：苹果属、检疫性真菌、冬生疫霉、丁香疫霉、栗黑水疫霉、四重PCR分子检测

所属期刊栏目：39

分类号：S436.611.1(病虫害及其防治)

资助基金：国家质检总局项目2012IK286,2013IK290;国家"十二五"科技支撑计划2012BAK11B02

在线出版日期：2017-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：7-14