中华大蟾蜍galectin-3cDNA的克隆、序列分析及原核表达载体的构建
通过PCR扩增出中华大蟾蜍8ufogargarizans半乳糖凝聚素3(gal3)cDNA全长开放读码框(ORF)并克隆至pGM—T载体,经DNA测序确定获得全长ORF序列(GenBank登录号为JN993733).序列分析表明中华大蟾蜍gal-3的ORF是由789个碱基组成,编码262个氨基酸残基组成的蛋白质.推导氨基酸序列同源性比较发现,中华大蟾蜍与非洲爪蟾Xenopuslavis同源性最高,为51%,与其他10种动物的同源性在41%-50%之间.SMART分析显示gal-3蛋白在136-259位氨基酸存在保守的半乳糖结合域.NetPhos预测gal-3在Ser-6和Ser-186有潜在的丝氨酸磷酸化位点.gal-3氨基酸序列构建的进化树符合传统动物分类学特点.经菌落PCR、双酶切和DNA测序确认gal-3的ORF正确插入原核表达载体pET-28b,表明原核表达用重组质粒构建成功,为研究其蛋白功能和生物学功能奠定了基础.
中华大蟾蜍、半乳糖凝聚素3、基因克隆、原核表达载体构建
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Q959.53(动物学)
2006年浙江省留学人员科技活动择优基金;2011年度浙江省科技创新活动计划新苗人才计划基金资助项目2011R412042;2010年度浙江省大学生科技创新活动计划新苗人才计划基金资助项目2010R412003
2012-09-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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